EMPLEO DE MICROSCOPÍA RAMAN CONFOCAL COMO INDICADOR DE INTERACCIÓN DE ACEITES ESENCIALES EN SUPERFICIES LIPOSOMALES

Resumen

Entre las aplicaciones de los aceites esenciales (AEs) se destaca la actividad fungicida sobre fitopatógenos, que se debe principalmente a sus interacciones con las membranas lipídicas de las células del hongo. Para evaluar dicha actividad se emplean vesículas unilaminares modelo que imitan la membrana plasmática. Nuestro interés se centra en el estudio del AE de Tagetes minuta L., cuya composición evidenció una inusual concentración de verbenona. En este trabajo presentamos a la microscopía Raman confocal como herramienta para determinar las alteraciones que pueden experimentar las membranas en respuesta a agentes externos (verbenona).

Se registraron los espectros Raman de liposomas de DLPC y DPPC puros e incubados con verbenona (5 Mm). Se empleó un microscopio Raman confocal DXR (Thermo Scientific) y un espectrómetro Raman dispersivo Smart Raman DXR (Thermo Scientific) con láser de 532 nm. Se identificaron las señales asignadas a los modos nC‑H, nC-C, nPO₂^-, dCH₃ y dCH₂ de las cadenas acílicas de los lípidos^1,2, y se evaluaron las poblaciones “gauche (g)” y “trans (t)” (que indican alteración en la conformación de las cadenas alquílicas por aumento del desorden), por comparación de la intensidad del
nC-C_{t en fase (iph)}/nC‑C_g. La relación [In_sCH₃]/[In_sCH₂] da cuenta de la libertad
vibro-rotacional del metilo terminal, mientras que [In_s]/[In_a] del -CH₂ se relaciona con el movimiento rotacional y el acoplamiento intermolecular de las cadenas.
[Id-CH₃]/[Id-CH₂], involucra la libertad de movimiento intramolecular y el acoplamiento/desacoplamiento de cadena.

En DPPC se destaca el aumento en la libertad rotacional y vibracional de -CH₃ con el agregado de verbenona. Se observa un aumento en el movimiento rotacional y en el acoplamiento intermolecular de las cadenas, y un incremento de [Id-CH₃]/[Id-CH₂]: mayor libertad de movimiento intramolecular y desacoplamiento de cadena. La intensidad de la banda de nC-C_{t iph} también aumenta, sugiriendo una interdigitación. Se observa además un incremento en la población gauche (desdoblamiento de la señal debido a la población g-t-g), y una interacción a nivel cabeza polar (nPO₂^-), lo que favorecería el ingreso al liposoma. En cuanto a DPLC, también se observa un incremento en la libertad de vibro-rotacional de los grupos metilo terminales, al igual que aumenta la población gauche. Se observa una alta interacción con la región polar, dado por el aumento en la intensidad relativa de la banda de PO₂^- (banda a 1121 cm^-1 respecto a la de 1097cm^-1). Se concluye que verbenona, en la concentración empleada, penetraría una membrana liposomal compuesta por los lípidos estudiados, fundamentalmente por interacciones a nivel de las cabezas polares. Se profundizarán los estudios, variando concentración del terpenoide, tiempo de incubación y/o la composición de la membrana, entro otros factores.

Referencias:

1. Petruk, A. et al. Spectrochimica Acta Part A: Molecular and Biomolecular Spectroscopy, 2013, 112, 403–409.
2. Petruk, A. et al, J. Raman Spectrosc., 2013, 44, 346–35.